Gabriel Knight ist ein klugscheißender Buchladenbesitzer und Möchtegern-Autor. Er ist der letzte in einer langen Reihe von Schattenjägern, die dazu bestimmt sind, übernatürliche Kräfte des Bösen zu bekämpfen. Gequält von schrecklichen Albträumen, muss er jeden wachen Moment damit verbringen, die Seitenstraßen und Hinterhöfe von New Orleans nach dem Schlüssel zu seiner dunklen Vergangenheit zu durchforsten. Eines Tages erschüttert ein blutiger Mord die Bewohner der Stadt. Der mit der Untersuchung des Verbrechens beauftragte Polizeidetektiv ist Gabriels Freund. Anfangs sammelt Gabriel Beweise in der Hoffnung, das Material für seinen neuen Roman verwenden zu können; doch schon bald wird er persönlich in die Ermittlungen verwickelt und taucht immer tiefer in die Welt der Geheimgesellschaften und mörderischen Kulte ein.
Gabriel Knight: Sins of the Fathers ist ein Abenteuer-Spiel in der dritten Person, in dem Rätsel gelöst werden müssen. Das von Jane Jensen entwickelte Spiel unterscheidet sich von den Quest-Spielen von Sierra (z. B. Space Quest) durch sein realistisches Setting und den Schwerpunkt (trotz der übernatürlichen Elemente und des Humors) auf reifen Themen und Detektivarbeit. In dieser Hinsicht ähnelt es eher den früheren Laura Bow-Spielen des Unternehmens.
Die auf Symbolen basierende Benutzeroberfläche des Spiels ist dieselbe wie in den früheren Titeln von Sierra, mit verbalen Befehlen, die eine Interaktion mit der Spielwelt und ihren Bewohnern ermöglichen. Obwohl das Spiel immer noch viele inventarbasierte Rätsel enthält, die für ein klassisches Adventure charakteristisch sind, ist das Gameplay stark auf Dialoge ausgerichtet. Typischerweise muss Gabriel andere Charaktere befragen und dabei Gesprächsthemen auswählen, um nach und nach Hinweise zu finden und der Lösung des Rätsels näher zu kommen.
Die Schauplätze des Spiels sind im handgemalten Stil gestaltet. Die CD-Version des Spiels fügt den Dialogen eine vollständige Sprachausgabe hinzu, ebenso wie die Stimme des Erzählers den Textbeschreibungen.